葡聚糖凝膠玻璃柱是生物分離和純化領(lǐng)域中的一種重要工具,主要由葡聚糖凝膠作為固定相,填充于玻璃柱中。葡聚糖凝膠是由葡聚糖和甘油基通過(guò)交聯(lián)形成的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),具有分子篩性質(zhì),能夠依據(jù)分子量差異分離生物大分子,如蛋白質(zhì)、酶、核酸和多糖等。
為了確保
葡聚糖凝膠玻璃柱準(zhǔn)確的分離結(jié)果和延長(zhǎng)使用壽命,正確的清洗步驟是非常重要的。
1、在開(kāi)始清洗之前,需要將柱上的樣品轉(zhuǎn)移走,并用適當(dāng)?shù)木彌_液進(jìn)行沖洗,以確保樣品的去除,然后按照以下步驟進(jìn)行清洗。
2、預(yù)洗:將柱與一定量的去離子水連接,以去除柱內(nèi)的雜質(zhì)和殘留物。使用足夠的水量,確保柱內(nèi)的雜質(zhì)被沖洗掉。預(yù)洗時(shí)間一般為15-30分鐘,可以根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。
3、酸堿清洗:使用酸性和堿性溶液進(jìn)行清洗,以去除柱內(nèi)的有機(jī)和無(wú)機(jī)雜質(zhì)。首先,將柱與稀酸(如1MHCl)連接,讓其通過(guò)柱內(nèi)流動(dòng)一段時(shí)間(通常為15-30分鐘)。然后,將柱與稀堿(如1MNaOH)連接,同樣讓其通過(guò)柱內(nèi)流動(dòng)一段時(shí)間。這樣可以有效去除大部分的有機(jī)和無(wú)機(jī)雜質(zhì)。
4、再生:柱內(nèi)的葡聚糖凝膠可能會(huì)因?yàn)槎啻问褂枚セ钚?,需要進(jìn)行再生。將柱與再生緩沖液(通常為1MNaCl)連接,讓其通過(guò)柱內(nèi)流動(dòng)一段時(shí)間(通常為15-30分鐘)。再生緩沖液可以去除殘留的樣品和鹽類(lèi),并恢復(fù)柱的活性。
5、再平衡:再生后,需要進(jìn)行再平衡步驟,以確保柱內(nèi)的緩沖液和樣品達(dá)到平衡。將柱與平衡緩沖液(通常為20mMTris-HCl)連接,讓其通過(guò)柱內(nèi)流動(dòng)一段時(shí)間(通常為15-30分鐘)。這樣可以使柱內(nèi)的緩沖液和樣品達(dá)到一致的條件。
6、沖洗:使用足夠的去離子水進(jìn)行沖洗,以確保柱內(nèi)的緩沖液和樣品被去除。沖洗時(shí)間可以根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。
總之,葡聚糖凝膠玻璃柱通過(guò)預(yù)洗、酸堿清洗、再生、再平衡和沖洗,可以有效去除雜質(zhì)、恢復(fù)柱的活性,并確保柱內(nèi)的緩沖液和樣品達(dá)到一致的條件。正確的清洗步驟不僅可以保護(hù)其質(zhì)量,還可以提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。